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　　灰區(qū)的設(shè)置有二種： （1）CO × （1±C） ，C 為該試劑的批內(nèi)C （一般在15%～ 20% 間） ；（2）CO ±2S，S 為做室內(nèi)ROC 的S。

 

　　另外，個(gè)人認(rèn)為： ELISA“灰區(qū)”對(duì)于不同項(xiàng)目和應(yīng)用的領(lǐng)域不同，其設(shè)置不能一概而論。根據(jù)美國(guó)疾病控制中心 （CDC） 對(duì)美國(guó)Ortho 的抗HC 檢測(cè)的ELISA 試劑盒進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)只有檢驗(yàn)結(jié)果S/CO ≥318 時(shí)，高度預(yù)示HC 抗體真陽(yáng)性狀態(tài)；若檢驗(yàn)結(jié)果S/CO < 318，存在較高的假陽(yáng)性。在血站系統(tǒng)的獻(xiàn)血員抗HC 篩查用上述兩種灰區(qū)的設(shè)置方法沒(méi)有什么不可；如果臨床實(shí)驗(yàn)室抗HC 的灰區(qū)也按前者設(shè)置，勢(shì)必存在較多的假陽(yáng)性。

 

　　ELISA 質(zhì)量保證是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測(cè)的質(zhì)量?，F(xiàn)分析如下。

 

　　1、試劑因素：檢測(cè)的原理均基于抗原抗體反應(yīng)。由于該反應(yīng)過(guò)程受多種因素的影響，如普遍存在基質(zhì)效應(yīng)、交叉反應(yīng)等，因而檢測(cè)結(jié)果難以溯源，不同方法、不同試劑之間甚至同一試劑不同批號(hào)間結(jié)果均缺乏可比性。試劑質(zhì)量在很大程度上決定了檢測(cè)的水平，因此在引入新項(xiàng)目之前必須對(duì)試劑進(jìn)行嚴(yán)格的評(píng)估。試劑的評(píng)估有以下幾個(gè)步驟： （1） 確定開(kāi)展該項(xiàng)目的必要性；

 

　?。?） 了解該項(xiàng)目現(xiàn)有的檢測(cè)方法和原理；

 

　?。?） 在了解試劑的組成基礎(chǔ)上選擇多家試劑盒進(jìn)行比較，判斷標(biāo)準(zhǔn)理想?yún)⒖挤椒ɑ騾⒖嘉镔|(zhì)，其次為臨床的滿意度及機(jī)構(gòu)的報(bào)告如各級(jí)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)、CDC 報(bào)告等；

 

　　（4） 定期對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行追蹤反饋直至終認(rèn)可該試劑。

 

　　2、方法學(xué)：ELISA 測(cè)定模式包括以下幾種： 雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM 抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法因受操作時(shí)差所引起的不公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。

 

　　3、樣本因素：標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。其中外源性干擾因素是我們?cè)跈z測(cè)過(guò)程中可以避免也是必須避免的因素，而避免內(nèi)源性因素的干擾則主要通過(guò)選擇合適的試劑盒，在臨床中遇到少見(jiàn)的疑難病例時(shí)應(yīng)當(dāng)考慮到內(nèi)源性干擾因素的存在。

 

　　4、操作因素：ELISA 測(cè)定一般遵循以下步驟，包括固相包被→加樣品→溫育→洗滌→加酶結(jié)合物→溫育→洗滌→加底物→溫育→顯色→終止顯色→比色。目前各種形式的ELISA 自動(dòng)分析儀已經(jīng)進(jìn)入市場(chǎng)，如廣泛應(yīng)用于血站系統(tǒng)的微板式全自動(dòng)酶免分析儀，其試劑為開(kāi)放式的，而對(duì)于其它類型的，則試劑和儀器往往是配套的。但當(dāng)前大部分醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室均采用手工操作加儀器測(cè)定的方式。ELISA 操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。